En los últimos años la citometría de flujo ha tenido un importante avance en las áreas clínica, investigación médica e investigación básica.
Esta tecnología tiene la capacidad de analizar una población celular para lograr una identificación precisa y rápida de la misma en un contexto cuantitativo. Además es posible separar una población celular de una mezcla heterogénea y conjugar el poder del análisis multiparamétrico con la selección de un determinado tipo celular para ser utilizado en otras muchas aplicaciones de uso común en la investigación tales como: cultivo celular, secuenciación del genoma de poblaciones celulares, PCR, Western blot, estudios cinéticos, entre otros.
*NOTA: En esta unidad no se realizan técnicas de marcaje de células; se reciben las células ya marcadas previamente por el investigador.
Análisis de Inmunofenotipos
Esta técnica permite caracterizar y cuantificar subpoblaciones celulares, evaluando múltiples parámetros, como tamaño, complejidad, funciones y componentes celulares. Dentro de la Unidad se realizan análisis de viabilidad, marcadores de superficie, determinación de proteínas intracelulares, ciclo celular, TUNEL, Anexina V, Expresión de genes reporteros, Side Population, potencial de membrana mitocondrial, entre otros.
Requisitos de la muestra:
* Marcadores celulares
Conteo celular: 700,000-1,000 000 células
Resuspendidas en PBS 1x 500ul
Viabilidad mínima 80%
Controles (Autofluorescencia, Isotipo, Fluorescencia menos uno)
* Ciclo celular
Conteo celular: Minímo 1, 000 000 de células
Resuspendidas en Buffer PBS y filtradas por malla de 70micras
* Viabilidad
Conteo celular: 700,000-1,000 000 células
Control de Autofluorescencia
*Anexina V
Conteo celular: 700,000-1,000 000 células
Controle de Autofluorescencia
Control Positivo y Negativo
*Expresión de genes reporteros
Conteo celular: 700,000-1,000 000 células
Controles de Autofluorescencia
Separación celular
Este proceso nos permite la separación física de poblaciones celulares que se diferencian en uno o varios parámetros que son analizables por citometría de flujo. La separación celular actualmente se basa en la separación de gotas cargadas eléctricamente. Dentro de la Unidad se llevan a cabo separaciones celulares en tubo o placa.
Requisitos de la muestra:
Conteo celular: Mínimo 1,000 000; Máx 30,000 000 células
Resuspendidas en Buffer PBS 1x o PBS suero fetal y filtradas por malla de 70micras
Ciclo celular en tejido
Por medio de esta técnica podemos determinar el contenido de DNA de cada célula y determinar su distribución en las diferentes fases del ciclo celular (G1, S, G2 o M). También nos brinda información sobre el grado de haploidía de células malignas y el porcentaje de estas que se encuentran en fase S y de esta manera conocer el tamaño del tumor, el estado nodal y el estado de expresión de marcadores para ayudar a establecer el pronóstico del tumor.
Dentro de la Unidad se realizan estudios de ciclo celular en tejidos humanos y de rata embebidos en parafina, fijados o frescos.
Requisitos para procesar la muestra:
Grosor de tejido 50 micras
Corte en parafina y tejido fijado en fresco
DNA QC Particles
Son controles de contenido de DNA y permiten la discriminación de dobletes, lo cual es de gran utilidad cuando no se cuentan con controles internos del experimento.
Cycle test plus DNA reagent
Se proporciona un conjunto de reactivos para el aislamiento y tinción de los núcleos de células de muestras de tejido sólido fresco o congelado y células en suspensión. Ofrece información sobre el contenido de DNA y su distribución en las diferentes fases del ciclo celular.
FACS ARIA
Citómetro de alto rendimiento que permite la detección de 13 fluoróforos (FITC, PE, PI, etc) en una misma muestra, arrojando un total de 15 parámetros diferentes, 13 colores, FSC y SSC.
ATTUNE
Citómetro acústico con dos láseres (rojo y azul) para lecturas de poblaciones celulares marcadas.
